Stap 15: Uitvoeren van de machine
Om te testen van de machine, we een seriële verdunning van 2,3 diaminophenazine gemeten. Dit het product van een gangbare reactie in een soort bioassay genoemd ELISA. In de analyse, de stof te meten is gevangen genomen in de put microplate, meestal door een specifiek antilichaam. Een enzym genaamd mierikswortelperoxidase is gekoppeld aan het antilichaam en dit katalyseert de omzetting van een kleurloze samengestelde o-fenyleendiamine dihydrochloride (OPD) in een geel: 2,3 diaminophenazine. De reactie wordt weergegeven in de afbeelding hierboven.
De intensiteit van de kleur rechtstreeks verband houdt met de concentratie van de stof worden bepaald, en de bepaling kan worden aangepast aan verschillende stoffen met behulp van verschillende antilichamen.
We zetten een aantal uiteenlopende concentraties van 2,3 diaminophenazine voor het testen van de machine en ze op een commerciële spectrofotometer gecontroleerd. De machine die we gebruikten was een relatief goedkoop - ongeveer 10.000 pond. De grafieken van de commerciële machine en onze spectrofotometer zijn hierboven weergegeven.
Ik moet zeggen, dit werkte beter dan we gedacht dat het zou. De gegevens zijn echt vrij goed, hoewel de commerical machine hogere verticaal absorptie met nauwkeurigheid vindt-de lineariteit brak op over A = 1.0 voor onze machine. Bij een extinctie van 1, slechts 10% van het licht maakt het naar de detector en zo de gevoeligheid van de detector wordt belangrijker. U zult merken dat het verloop van de twee lijnen anders, is hoewel dit kan worden aangepast door het tweaken van de berekening in de code. Belangrijker nog, kan de machine voltooien van een volledige circuit van de 96 monsters in perfecte uitlijning en vervolgens terugkeren zelf naar het beginpunt opnieuw.