Stap 6: vergadering
Zodra alle chemische stoffen en DNA aangekomen en de stoichiometrie voltooid was, was het tijd te monteren de nanostructuren. We hebben de volgende methoden gebruikt.
Methoden
- 1 X Buffer maken Toevoegen van 20 μl 10 X buffer tot 1,5 ml koker
- Resuspendeer nietjes 625 μl water toevoegen aan elke nietje in 96 well-plate
- Zwembad nietjes 1 μl per nietje aan tube 1,5 ml toevoegen.
- Zwembad steiger Voeg toe 40 μl steiger aan tube 1,5 ml
- Voeg Water toe 17 uL water toevoegen tot 1,5 ml koker.
- Toevoegen van MgCl Voeg 12 µl van MgCl
- Thermocycle Ontharden van 95 ° C tot 20 ° C in een PCR-machine op 1 ° C/minuut in stappen van 0,1 ° C
Belangrijke opmerkingen
- Het was belangrijk om toe te voegen de MgCl laatst vanwege de interacties tussen de kationen en het DNA
- Het was belangrijk voor het opwarmen van de bovenkant van de thermocycler tot 105 ° C om te voorkomen dat gradiants van de temperatuur in het systeem. Als de temperatuur van de bodem van de thermocycler hoog en de temperatuur van de bovenkant van laag is, het systeem zal verdampen op de bodem en de zouten zullen plaat uit oplossing, wat leidt tot een ongewenste witte kristalachtige substantie die voorkomen op de onderkant van de buis
Ongeteste alternatieve methoden
Terwijl we een off-the-shelf thermocyclergebruikt, zijn er diverse andere manieren die je zou kunnen doen de onthardende stap. Zou men te monteren van uw eigen en gebruiken, rekening houdend met de hierboven om ervoor te zorgen dat je niet verdamping verwarming-notitie. Of, het is waarschijnlijk gewoon de origami bijeen door het gloeien van het DNA in warm water te brengen! Meng het DNA en kit chemicaliën zoals beschreven hierboven, maar in plaats van met behulp van een thermocycler te ontharden van het DNA, het kook water (100 ° C) en het toevoegen van de buizen. Zorg ervoor dat ze volledig worden ondergedompeld en de hitte uitschakelen op de kachel. Laat het water afkoelen met de buizen onder water. Dit moet het thermocycling-proces na te bootsen zal, maar het minder nauwkeurig over de exacte temperatuur helling.
