Stap 1: Meer over PCR
PCR bestaat uit 3 stappen die over en weer worden gefietst:
Denaturatie (~ 94C) bij deze stap, DNA 'einden uit elkaar', splitsing van een dubbele helix in enkele strengen
Gloeien (~ 60C) inleidingen binding aan de single-stranded DNA
Uitbreiding (~ 72C) Polymerase complimenten de DNA synthese strengen die van de doel-reeks zijn
Elk van deze fasen kunnen 20-30 seconden lang en herhaalde 30 + keer, afhankelijk van het protocol. De meeste protocollen suggereren ook met een langere oorspronkelijke denaturatie stap en een langere laatste uitbreiding.
Een eenvoudige tutorial:
http://www.dnalc.org/resources/Animations/PCR.html
Er is ook een bos van verwante bronnen hier: http://www.lab-manual.com/lm_209.htm
De resultaten van PCR kunnen worden gevisualiseerd met behulp van de Elektroforese van het gel. DNA-monsters worden geladen in een gel en een hoge spanning overheen wordt toegepast. Omdat DNA negatief geladen is, zal het reizen door het gel op verschillende snelheden, afhankelijk van de grootte. Dit proces wordt effectief gescheiden uit de stukken die u wilt, en je ziet ze door kleuring van de gel. Hier is een goede tutorial en als je te DIY het probeert, de Macgyver Project is een vrij goede bron.
PCR kan worden uitgevoerd met behulp van 3 waterbaden (elk gehouden op een van de drie temperatuurinstellingen). Een mens kan fysiek bewegen de monsters uit een bad naar de volgende 30 + keer. PCR machines werden ontwikkeld om het proces te automatiseren, maar de meeste laboratoriumkwaliteit degenen kosten duizenden dollars. Maar ze hoeven niet te! Vandaag is er een groeiend aantal PCR opensourceprojecten, waaronder OpenPCR (600$), LavaAmp ($200) en de Coffee Cup PCR (350$).
